Az egészséghez 1978-ban a leukocita lízis immunológiai vizsgálatai. Módszer az állati tuberkulózis korai diagnosztizálására. A. Normalizálás analógiával

18.01.2009, 17:36

Helló!
Kérjük, javasoljon megoldást a következő helyzetre. Mindig is voltak problémáim a fogászati ​​kezeléssel, nem is olyan régen több fogat is el kellett távolítani. A Septonestet fájdalomcsillapításra használták. Beadása után a nyomás 190-re emelkedett, és a tachycardia 150 ütés/perc sebességgel kezdődött. (a vérnyomásom 110) A Tavegil injekció után a vérnyomásom kezdett normalizálódni. Másnap rekedtséget észleltek. Az orvos úgy véli, hogy nekem az érzéstelenítők ellenjavalltok: ubestezin, ultrakain, septoneszt.
Mivel még kezelnem kell a fogaimat, mit tegyek?

19.01.2009, 00:06

Kezelték már fogait érzéstelenítéssel az eset előtt? A korábbi érzéstelenítő injekciókat is kísérte ilyen reakció, vagy ez az első eset? Az is érdekelt, hogy milyen érzéstelenítést alkalmaztak, milyen az adrenalin koncentrációja az alkalmazott érzéstelenítőben, valamint a szív- és érrendszeri betegségek jelenléte
Az ilyen reakció hátterében az érzéstelenítő anyag véredénybe jutása állhat fenn (egyes érzéstelenítési típusoknál fennáll a véredénybe jutás lehetősége). Az ilyen tünetek az érzéstelenítő részét képező adrenalinra adott reakciók is lehetnek.
Cégünknél a helyi érzéstelenítőszer intoleranciában szenvedő betegeket a kórház sebészeti fogászati ​​osztályára küldik, ahol helyi érzéstelenítésben vagy általános érzéstelenítésben kivizsgálják és kezelik őket.

19.01.2009, 09:51

Köszönöm a gyors választ! Ezt megelőzően kisebb beavatkozások alkalmával lidokaint használtam. Nemrég eltávolítottam vele egy anyajegyet. Jól tolerálta, de úgy tűnik, az adag kicsi volt.
A Septonest kétszer használtam, a másodikat leírtam neked, az elsőt pedig szintén a fogászaton, ami után 140-re emelkedett a vérnyomásom és 5-6 óráig nem tudtam elállítani a vérzést a fogból.
A szív- és érrendszeri betegségek között van extrasystolés aritmia.
Az orvos írt nekem ellenjavallatokat: ubestezin oldat 4 u, ultrakain oldat 2 u, septonest oldat. Az adrenalinkoncentrációra sajnos nem tudok válaszolni.

18.02.2009, 18:33

Helló,
Csináltam egy immunológiai tesztet érzéstelenítőre, és a következő eredmények születtek:

1. Ultracaine D-S - 81 (11%)
2. Ultracaine D-S forte - 61 (32%)
3. Anrenalin - 64 (29%)
4. Lidokain - 58 (36%)
5. Scandonest - 76 (16%)
6. Ubestezin forte - 58 (36%)
7. Septanest andrenalinnal - 65 (28%)
Az aktivitás mértéke szerint:

Kiderült, hogy ezek a gyógyszerek nem használhatók (mind >10%) a fogászatban érzéstelenítés során. Szóval mit tehetsz most?

18.02.2009, 21:12

Adok egy tippet az elemzés értékére vonatkozóan:

"A specifikus leukocitolízis reakció a leukociták számának változását mutatta a 91-es kontrollhoz képest (100%) a következő gyógyszerekkel:
...
4. Lidokain - 58 (36%)
...
lízis akár 11% - gyengén pozitív
lízis akár 21%-40% - közepesen pozitív
lízis akár 41%-100%-ig - élesen pozitív

Ezt megelőzően kisebb beavatkozások alkalmával lidokaint használtam. Nemrég eltávolítottam vele egy anyajegyet. Jól tűrte

A találmány a laboratóriumi diagnosztika területére vonatkozik, és nyulak myxomatosisának expressz diagnosztizálására használható. A módszer lényege, hogy egy specifikus leukocita lízis reakciót (SLLR) hajtanak végre a B-82 törzsből származó myxomatosis elleni vakcinával, kiszámítják az RSLR indexet és diagnosztizálják a myxomatózist, ha annak értéke 10% vagy több. A technikai eredmény egy olyan módszer kifejlesztése, amely lehetővé teszi a betegség korai stádiumában történő gyorsított diagnózist, valamint a myxomatosis tünetmentes lefolyásának azonosítását. 1 fizetés fájl, 2 táblázat.

A találmány állatgyógyászatra, különösen a myxomatosis diagnosztizálására szolgáló expressziós eljárásokra vonatkozik.

Különféle módszerek léteznek a nyúl myxomatosis diagnosztizálására, beleértve az antigének kimutatását az érintett bőrön fluoreszcens antitestek segítségével, az antitestek kimutatását, a keringő immunkomplexeket komplementkötési reakciókkal, az immundiffúziós reakciókat, a neutralizációs reakciókat és az enzimes immunológiai vizsgálatokat (Gunenko V.V. et al. O diagnózis és megelőzés). nyulak myxomatosisáról, Veterinary Medicine, 12, 44-45 (1987). Az ismert módszerek hátrányai a munkaintenzitás, a drága berendezések jelenléte, valamint az, hogy a fertőzést követő első napokban nem lehet meghatározni a vírus jelenlétét.

A találmány célja a myxomatosis kórokozójának kimutatásához szükséges idő csökkentése az állati szervezetben. Az észlelés a fertőzés után három-hat órával kezdődik.

Ennek a célnak az elérése az immunkompetens vérsejtek – leukociták – azonnali aktiválódásán, fokozott érzékenységén és túlfeszítésén alapszik a szervezeten kívüli, ugyanazon antigénnel szembeni ismételt expozíción, amely korábban a szervezetbe került.

A nyulak myxomatosisának diagnosztizálásának módszere a következő. A vizsgált állatból vérmintát vesznek. Egy 0,05 ml 3,8%-os nátrium-citrát oldatot tartalmazó kémcsőbe adjunk 0,1 ml tesztvért és egy munkadózist az antigénből - 0,05 ml száraz élőtenyészetes vakcinát a „B-82” törzsből származó nyulak myxomatosisa ellen. egy immunizáló dózis hígítása fiziológiás oldat ml-enként. A kontrollcsövet ugyanilyen térfogatban töltjük, de a fiziológiás oldatot antigén nélkül töltjük.

A csöveket két órán át termosztátban inkubáljuk +37°C hőmérsékleten, 30 percenként rázva. Ezután a vörösvértestek elpusztítására a kontroll- és kémcsövekből 0,02 ml vért 0,4 ml 3%-os ecetsavoldattal ellátott kémcsövekbe töltünk, és enciánibolyával színezzük. Számolja meg a leukociták számát mindkét mintában a Gorjajev-kamrában, és számítsa ki a specifikus leukocitalízis reakciósebességét (százalékban) a következő képlet segítségével:

Az RSLL akkor tekinthető pozitívnak, ha 10% vagy magasabb.

Súlyos leukocitózis esetén, amikor nehéz a leukociták számlálása, a teszt kontroll és kísérleti vérmintákat fiziológiás oldattal 1:1 vagy 1:2 arányban hígítjuk.

Az antigén (a B-82 törzsből származó nyúl myxomatosis elleni száraz élőkultúrás vakcina) munkadózisának meghatározásához tíz egészséges nyulat választottunk ki. Az egyes nyulak vérét három mintára osztottuk. Három kémcsőbe 0,1 ml vizsgálati vért adtunk 0,05 ml 3%-os nátrium-citrát oldattal. Ezután 0,05 ml antigént - a "B-82" törzsből származó nyulak myxomatosisa elleni száraz élő tenyésztési vakcinát - adtunk az első csőhöz négy immunizáló dózis hígításában fiziológiás oldat ml-enként, a másodikban - 0,05 ml vakcina két immunizáló dózis hígításában fiziológiás oldat ml-enként, a harmadikban - 0,05 ml vakcina egy immunizáló dózis hígításában fiziológiás oldat ml-enként.

A csöveket két órán át +37°-os hőmérsékleten inkubáltuk, 30 percenként rázva. Ezután a vörösvérsejtek elpusztítására a kontroll- és kísérleti kémcsövekből 0,02 ml vért 0,4 ml 3%-os ecetsavoldattal töltött kémcsövekbe vittünk, és enciánibolyával színeztük. Ezután megszámoltuk a leukociták számát a Gorjajev kamrában lévő összes kémcsőben, és kiszámítottuk a specifikus leukocita lízis reakciósebességét (százalékban) a képlet segítségével:

ahol Lk és Lo a leukociták abszolút száma a kontroll és a kísérleti mintákban.

Az egészséges nyulak RSLL-jének 10% alatt kell lennie. Az eredményeket táblázatban mutatjuk be. 1.

Amint az 1. táblázatból látható, az RSLL az összes mintában nem haladta meg a 10%-ot, ezért az antigén munkadózisaként ésszerűbb a nyúl myxomatosis elleni vakcina hígítását, egy száraz élőtenyészetet bevenni. „B-82” törzs fiziológiás oldat milliliterenkénti egy immunizáló dózisával.

A myxomatosis retrospektív diagnózisához egy diszfunkcionális farmon nyulak vérét vizsgáltuk.

A nyulak klinikai állapotának eredményei alapján 4, egyenként 5 állatból álló állatcsoportot alakítottunk ki (2. táblázat).

Az első csoport - a myxomatosis látens formájával rendelkező vírushordozó nyulak - érintkeztek a betegekkel, de klinikai elváltozások nélkül. Néhányuknak észrevehető szőrtelen területei voltak, ami azt jelzi, hogy a kórelőzményben myxoma csomók fordultak elő.

A második csoportba - klinikailag myxomatosisban szenvedő betegek - a beteg nyulak voltak, akiknél a szemhéjak, a fültövek, az anogenetikus régió, a hát duzzanata, a fül, a fej és a szemhéj bőrében göbös, korlátozott képződményekkel.

A harmadik csoportba tartozó nyulakat vakcinázták annak érdekében, hogy megállapítsák a leukocita lízis dinamikáját attól a pillanattól kezdve, hogy a myxomatózus antigén bekerült az állat szervezetébe, valamint hogy azonosítsák a leukocita lízis reakció jellemzőit a vakcinázott emberekben a vírushordozókhoz képest.

A negyedik csoportba tartozó nyulak klinikailag egészségesek, és nem fertőzöttek a myxomatosis vírussal, kontrollként szolgálnak.

A specifikus leukocita lízis reakció sebességét minden csoportban meghatároztuk. Ebből a célból vérmintát vettek az állatoktól. Minden mintát kísérleti és kontrollra osztottunk. Egy 0,05 ml 3,8%-os nátrium-citrát oldatot tartalmazó kémcsőbe 0,1 ml vizsgálati vért és egy munkadózisú antigént - 0,05 ml száraz élőtenyészetes vakcinát helyeztünk a „B-82” törzsből származó nyulak myxomatosisa ellen. fiziológiás oldathoz egy immunizáló dózis hígítását adjuk. A kontrollcsövet azonos térfogatú, de antigén nélküli sóoldattal töltöttük meg.

A csöveket két órán át termosztátban inkubáltuk +37°C hőmérsékleten, 30 percenként rázva. Ezután a vörösvérsejtek elpusztítására a kontroll- és kísérleti kémcsövekből 0,02 ml vért 0,4 ml 3%-os ecetsavoldattal töltött kémcsövekbe vittünk, és enciánibolyával színeztük. Mindkét mintában megszámoltuk a leukociták számát a Gorjajev-kamrában, és kiszámítottuk a specifikus leukocita-lízis reakciósebességét (százalékban) a következő képlet segítségével:

ahol Lk és Lo a leukociták abszolút száma a kontroll és a kísérleti mintákban.

Az RSLL akkor tekinthető pozitívnak, ha az arány 10% vagy magasabb volt.

Az eredményeket a 2. táblázat tartalmazza.

Amint a 2. táblázatból látható, a leukocita-lízis százalékos csökkenése vakcinázott nyulakban 3,2-szer nagyobb, mint a myxomatosis látens formájával rendelkező vírushordozó nyulaknál, és kétszerese, mint a klinikailag beteg betegeknél. A myxomatosis klinikai formájában szenvedő betegeknél a leukocita lízis százalékos aránya a teljes megfigyelési időszak alatt nagyon magas volt, elérte a 60-77%-ot.

A beoltott nyulak csoportjában a leukocita lízis százalékos arányának meredek növekedését tapasztalták a harmadik napon. Ez bizonyíték arra, hogy a B-82 törzsből származó nyúl myxomatosis elleni száraz élőtenyészetes vakcina a vér leukocitáinak szenzibilizációját okozza (az immunitásért felelős), amíg specifikus antitestek nem képződnek a szervezetben.

A leukociták lízise ép nyulakban a kísérlet teljes időtartama alatt nem haladta meg a 10%-ot, azaz. normál határokon belül volt.

Az RSLL vizsgálata lehetővé teszi a myxomatosis tünetmentes lefolyásának diagnosztizálását.

KÖVETELÉS

1. Eljárás nyulak myxomatosisának diagnosztizálására, azzal jellemezve, hogy specifikus leukocita lízis reakciót (SLLR) hajtanak végre a B-82 törzsből származó antimixomatózis vakcinával, kiszámítják az RSLR indexet, és a myxomatosis diagnosztizálására akkor kerül sor, ha az értéke 10. % vagy több.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás nyulak myxomatosisának diagnosztizálására, azzal jellemezve, hogy leukocitózis esetén a vérmintákat fiziológiás oldattal 1:1 vagy 1:2 arányban hígítjuk a leukociták megszámlálása előtt.

Jó nap! A nevem Elvira. A fő probléma a gyógyszerek. Például lázasan paracetamolt szedek - Quincke ödéma kezdődik, először azt hittem, hogy tévedés, egy későbbi betegség során próbáltam ki további gyógyszerek és provokatív ételek (méz, málna stb.) nélkül - az eredmény a ugyanaz az ödéma. Csinálok allergén tesztet - az eredmény negatív, de a leukociták lízisére is veszek tesztet - kétszer-háromszor meghaladja a normát (20-30% helyett... 10%). És így a gyógyszerek hatalmas listájával, kezdve többek között vitaminokkal, antibiotikumokkal, fájdalomcsillapítókkal és nyugtatókkal. Ha a gyógyszert beadják, a reakciók mindig különböznek az émelygéstől az eszméletvesztésig és a 80/40-es alacsony vérnyomásig. Kérem, magyarázza el, mi a különbség az allergén teszt és a lízis között?! Szinte kétségbe vagyok esve, a fiamnak is hasonló a helyzete. Már minden lehetséges mellékhatást tapasztaltunk, az enyhe betegségektől és csalánkiütéstől az anaphelaxiás sokkig (hála a Prednisone-nak - mindig segít). Régóta betegeskedünk így: elmúlik magától, vagy a vizsgálatok által jóváhagyott korlátozott gyógyszerlistánkkal kerül a kórházba. De ez annyira korlátozott, hogy az orvosok tanácstalanok, és nem tudják megmagyarázni nekem a két teszt közötti különbséget. Ha választ írsz, nagyon megköszönném, vagy egy linket az enciklopédiához, ahol megtalálod a választ. Még az is felmerült, hogy az előírtnál kisebb adagokat próbáljunk ki....

KÖVETELMÉNYEK

A KÍSÉRLETI TANULMÁNYOK ALKALMAZÁSÁHOZ A MUNKATERÜLET ÉS A LÉGKÖR LEVEGŐBEN AZ IPARI VEGYI ALLERGÉNEK MAXIMÁLISAN MEGENGEDETT KONCENTRÁCIÓJÁNAK IGAZOLÁSÁRA

MÓDSZERTANI UTASÍTÁSOK

MU 1.1.578-96

1. Az Orosz Orvostudományi Akadémia Foglalkozási Orvostudományi Kutatóintézete (Dueva L.L., Alekseeva O.G.), az Orosz Orvostudományi Akadémia Humán Ökológiai és Környezethigiéniai Kutatóintézete (Pinigin M.A., Tepikina L.A.) által kifejlesztett Intézet az Orosz Egészségügyi és Orvosi Ipari Minisztérium Immunológiai Intézete (Csernousov A.D.), Oroszország Egészségügyi és Orvosi Ipari Minisztériumának Központi Dermatovenerológiai Intézete (Umerov Zh.G.), Szentpétervári Munkahelyi Higiéniai és Foglalkozási Betegségek Kutatóintézete Oroszország Egészségügyi és Orvosi Ipari Minisztériuma (Sidorin G.I., Martinson T.G.), Fehérorosz Egészségügyi és Higiéniai Tudományos Kutatóintézet (Sevljakov V.V.), Harkov Foglalkozási Higiéniai és Foglalkozási Betegségek Kutatóintézete (Vasilenko N.M.), Lett Központi Kutatólaboratóriuma Orvosi Akadémia (Ivanova I.A.).

2. Jóváhagyta és hatályba léptette az Oroszországi Állami Egészségügyi és Járványügyi Felügyeleti Bizottság első elnökhelyettese - S. V. Semenov, az Orosz Föderáció egészségügyi főorvos-helyettese, 1996. október 21-én.

3. „A munkaterület levegőjében található ipari allergének higiéniai szabványosításával kapcsolatos kutatások szervezése” (1980) és az „Ideiglenes irányelvek a légköri levegő szennyezőanyag-koncentrációinak igazolására” című módszertani ajánlások helyett bevezetve. lakott területekről” (1989).

^ 1 felhasználási terület

Az irányelvek azoknak a toxikológusoknak szólnak, akik részt vesznek a munkaterület és a légkör levegőjében lévő káros anyagokra vonatkozó higiéniai előírások megalapozásában. Az irányelvek a munkaterület levegőjében és a légkörben előforduló ipari vegyi allergénekre vonatkozó higiéniai szabványok megállapítására irányulnak. A levegőben előforduló ipari allergénekre vonatkozó higiéniai szabványok (MAC-k és OSUV-k) alátámasztásának több mint tíz éves gyakorlata megerősítette ennek az intézkedésnek a hatékonyságát az allergiás betegségek kialakulásának megelőzésében az allergiára veszélyes iparágak dolgozói és az ipari régiók lakossága körében. Ezeket az irányelveket a toxikológiai allergológia elméletéről és gyakorlatáról az évek során felhalmozott adatok figyelembevételével dolgozták ki. Ugyanakkor egységes megközelítést biztosítunk a munkaterület levegőjében és a légkörben előforduló ipari vegyi allergének higiéniai szabványainak alátámasztására.

A kémiai vegyületekre és az ezeken alapuló komplex termékekre vonatkozó higiéniai szabványok megállapításakor az allergiaveszély értékelését a következő esetekben kell elvégezni:

Az allergológiai szempontból nem vizsgált kémiai osztályokba tartozó új kémiai vegyületek osztályozása során;

A már ismert allergéneket tartalmazó vagy szenzibilizáló hatású kémiai analógokkal rendelkező kémiai vegyületek és komplex termékek osztályozása során;

Ha allergiás panaszok vagy allergiás elváltozások klinikai tünetei vannak olyan személyeknél, akik kapcsolatba kerültek ezzel a kémiai vegyülettel vagy termékkel.

^ 2. A kutatás tervezésének sémája

A kutatás két szakaszban zajlik. Az 1. szakasz célja a vizsgált anyag allergén tulajdonságainak azonosítása, a 2. szakasz a higiéniai szabvány értékének megalapozása (lásd diagram).

A kutatás első szakaszában a tengerimalacok és egerek kifejezett szenzitizálásának módszereit alkalmazzák.

^ Kutatási tervezési séma

I. szakasz - az allergén tulajdonságok azonosítása

II. szakasz - az egészségügyi szabvány értékének indoklása

A. Normalizálás analógiával

^ B. Osztályozás a gyorsított és teljes séma szerint

Egyszerű kémiai vegyületek vizsgálatakor javasolt a tengerimalacok fül területén intradermálisan szenzibilizáló módszer alkalmazása és/vagy a késleltetett típusú túlérzékenység (a továbbiakban DTH) egerekben történő reprodukálása.

A tengerimalacok, mint a kémiai allergének hatására legérzékenyebb laboratóriumi állatok érzékenyítése lehetővé teszi a vizsgált anyag allergén hatásának felmérését. Ebből a célból az állatokat úgy szenzitizálják, hogy két adag anyagot juttatnak a fül területére: 50 és 200 μg/állat. A HRT egerekben történő szaporodása lehetővé teszi nemcsak az oldható, hanem a vízben oldhatatlan szilárd és pasztaszerű anyagok allergén tulajdonságainak azonosítását is, amelyek erős vagy mérsékelt allergén aktivitással rendelkeznek. Mivel a gyenge allergének egerekbe való bejuttatása nem eredményez egyértelműen meghatározott HRT kialakulását, ha az egereken végzett kísérlet eredménye negatív vagy megkérdőjelezhető, a tengerimalacokat ezenkívül 200 mcg/állat dózissal kell szenzitizálni. Ugyanakkor, valamint az állítólagosan gyenge allergén aktivitású anyagoknál nem zárható ki a még nagyobb szenzibilizáló dózis - 500 mcg/állat - alkalmazása sem. Komplex és nem térhálósított polimer termékek vizsgálatakor a tengerimalacok kombinált szenzibilizációját (a fül bőrébe és ezenkívül epikután) és/vagy a HRT egerekben történő reprodukálásának módszerét alkalmazzák.

Az I. stádiumú kutatás ezen kötelező módszerein kívül az állatok szenzitizálásának egyéb módszerei is alkalmazhatók megfelelő indikációkra. Ezért a dolgozók bőrét szennyező kémiai vegyületek és termékek, különösen a pépes és viszkózus anyagok vizsgálatakor célszerű a kontakt allergia kialakulásának lehetőségét ellenőrizni tengerimalacokon végzett ismételt epicutan alkalmazással. A vízben oldhatatlan ipari porok esetében már a vizsgálat első szakaszában alkalmazható a fehér patkányok intratracheális érzékenyítésének módszere.

Ha a vizsgálat első szakaszában a vizsgált anyag allergén tulajdonságait nem azonosítják, akkor általános toxikus hatású anyagként szabványosítják. Ha az érzékenyítési technikák közül legalább az egyik feltárta a vizsgált anyag allergén tulajdonságait, akkor a kutatás második szakaszát kell elvégezni.

A kutatás második szakasza a szabványosítási módszertől függően (analógia szerint, gyorsított vagy teljes séma szerint) a következő toxikológiai és allergológiai kísérleteket tartalmazza.

Az analógia útján történő szabványosítás során összehasonlítják az állatokban a referencia allergén és a vizsgált anyag bejuttatása által okozott szenzibilizáció súlyosságát és gyakoriságát, az első szakasz kifejezett szenzibilizációs módszereivel. Az oldhatatlan porok adagolásakor a fehér patkányok intratracheális szenzibilizációja is alkalmazható. Az egyszerű kémiai vegyületek esetében a referencia allergén egy már szabványosított anyag, amely kémiai szerkezetében hasonló, és ugyanazokat az aktív kémiai csoportokat tartalmazza, amelyek felelősek az érzékenység kialakulásáért. A komplex készítmény referencia allergénje egy már szabványosított készítmény, amely hasonló összetételű, és ugyanazt az összetevőt tartalmazza, amely az érzékenység kialakulásáért felelős.

Referencia allergén hiányában a kutatás második szakasza a szenzibilizációs küszöbértékek kísérleti meghatározását foglalja magában: az anyag egyszeri belélegzésével - Lim sens ac, ismételt belégzéssel - Lim sens ch. Értékek összehasonlítása Lim sens acÉs Lim sens ch Val vel Lim acÉs Lim ch Az integrált és specifikus hatásokra vonatkozó toxikológiai kísérletekben megállapították, lehetővé teszi annak meghatározását, hogy az érzékenyítő hatás korlátozó-e. Ezen adatok figyelembevételével a higiéniai szabvány értéke indokolt (lásd 6. pont).

A komplex vegyi termékek osztályozása során az állatokat a vizsgálat mindkét szakaszában a teljes termék felhasználásával érzékenyítik; szenzibilizáció észlelésekor az összes fő összetevőt tiszta formában felhasználják a vizsgálathoz, és ha az összetétel ismeretlen, akkor a teljes terméket vagy annak kivonatát (lásd 5.3. pont).

^ 3. Kutatások lefolytatása az allergén tulajdonságok azonosítására

3.1. Tengerimalacok intradermális érzékenyítése

A kísérletben 250-300 g tömegű fiatal tengerimalacokat használnak, 2 kísérleti és egy közös kontrollcsoportra osztva, amelyek mindegyike 8-10 állatból áll. A kísérleti csoportok állatait úgy szenzitizálják, hogy a fül külső felületének bőrébe, annak tövéhez közelebb fecskendeznek egyszer 50 (1. kísérleti csoport) és állatonként 200 μg (2. kísérleti csoport) vizsgált anyagot 0,02-0,1 térfogatban. ml. Oldószerként desztillált vizet, sóoldatot, acetont, alkoholt, Tween-80-at, dimetil-szulfoxidot stb. használnak. Az olajos termékek vizsgálatánál vizes emulziókat, térhálósított polimereknél pedig kivonatokat használnak (lásd 5.3. fejezet). A kontroll állatokat azonos térfogatú oldószerrel, emulgeálószerrel vagy extrakciós folyadékkal fecskendezzük be.

Az érzékenység kimutatása (lásd az 5. pontot) 8-10 nap elteltével történik. Az erős allergének mindkét dózisban kifejezett szenzibilizációt okoznak tengerimalacokban: az allergológiai tesztek csoportátlaga statisztikailag szignifikánsan eltér a kontroll állatokétól. A mérsékelt allergének csak állatonként 200 µg dózisban, 50 µg/állaton adagolva okoznak kifejezett szenzibilizációt - gyenge, ha szenzibilizációt az állatok 1/3-1/2 részében mutatnak ki, és a Az allergológiai vizsgálatok átlagos csoportmutatói nem térhetnek el a kontroll állatokétól. A gyenge allergének csak akkor okoznak enyhe szenzibilizációt, ha az anyagot állatonként 200 mcg-os dózisban adják be, és csak a vérsejtvizsgálatok lehetnek pozitívak, a bőrtesztek pedig negatívak.

^ 3.2. Tengerimalacok kombinált érzékenyítése

A komplex termékek és a bevált polimerek nagyon rosszul szívódnak fel, ebben az esetben tengerimalacoknál még a fülbőrbe adott 200 mcg/élő mennyiségben sem lép fel szenzibilizáció. Az allergén tulajdonságok meglétére vonatkozó végső döntés meghozatalához, ha az állatokon végzett allergológiai vizsgálatok negatívak, az anyag epikután alkalmazása másnap kezdődik. A 7. alkalmazás után a tengerimalacokat ismét teszteljük.

Az epikután alkalmazásra szánt anyag koncentrációját a bőrirritáló hatás vizsgálata során vagy egy speciális kísérletben választják ki: 6-8 tengerimalacnak, 250-300 g súlyú 7-10 napon keresztül (hetente 5 alkalommal) 3 cseppet kapnak. A vizsgált anyag és annak hígításai 1 :2, 1:10 és 1:100 a test oldalfelületének 2 x 2 cm-es nyírt „ablakán” Kényelmes illékony oldószert használni, amely nem irritálja a bőrt (aceton, 70°-os alkohol, dimetil-szulfoxid) oldószerként. Ha film képződik, 4 óra elteltével lemossák, más esetekben a bőrt nem kezelik semmivel. A kenőcsöket oldhatatlan anyagokból készítik (lehetőleg lanolinból, nem pedig vazelinből), amelyeket egy szem spatulával osztanak el az „ablak” felületén. Szenzibilizációhoz válassza ki azt a maximális koncentrációt, amely nem okoz kontakt dermatitisz kialakulását.

^ 3.3. A HRT meghatározása egerekben

A kísérleti és kontrollcsoportok 10 tiszta vonalú egeret (BALB/C, CA-1, DVA/2) vagy 16-20 fehér, tenyésztett egeret tartalmaztak, amelyek súlya 18-20 g. Az állatokat 10 mM vagy 100 μg tesztanyaggal érzékenyítettük egyszer intradermálisan a faroktövében. Az anyag szenzibilizáló dózisát 60 μl Freund-féle komplett adjuváns (PAF) és Hanks pH 7,5-es oldatának 1:1 arányban elkészített keverékében emulgeáljuk. PAF összetétel: 1 ml lanolin, 3 ml vazelin olaj, 5 mg hővel elölt BCG vakcina. Ehhez a térfogatú PAF-hoz adjon 50 μl Tween-20-at és 0,5 ml desztillált vizet. A keveréket autoklávozzuk. A kontroll állatokat 60 μl keverékkel fecskendezzük be a vizsgált anyag hozzáadása nélkül.

A szenzibilizáció kimutatására 5 nap elteltével a Hanks-oldatban oldott (szuszpendált) vizsgált anyagból ugyanannyit (10 mM vagy 100 μg) fecskendezünk az egerek hátsó mancspárnájába, mint az érzékenyítés során. 24 óra elteltével mérje meg mindkét hátsó mancs vastagságát mm-ben egy MK-0-25 műszaki mikrométerrel. Az ödéma mennyiségéről, i.e. a HRT fejlődését mindkét hátsó láb vastagságának különbsége alapján ítéljük meg (HRT indikátor). A kontroll állatokban általában 0,04-0,09 mm. A csoport átlagos HRT indexének statisztikailag szignifikáns többlete a kísérleti állatokban a kontroll állatokhoz képest a vizsgált vegyület kifejezett vagy mérsékelt érzékenyítő tulajdonságait jelzi.

^ 3.4. Többszöri epikután alkalmazás tengerimalacokon

Az érzékenyítő koncentráció kiválasztása ugyanúgy történik, mint a kombinált szenzibilizáció esetében (lásd 3.2 pont). Az epikután alkalmazásokat hetente 5 alkalommal végezzük 4 héten keresztül (összesen 20 alkalmazás). Ha a kísérlet 2.-3. hetében a tengerimalacokon kontakt dermatitisz jelei mutatkoznak, akkor a szenzibilizáló alkalmazásokat a bőr egy másik részén folytatják. A szenzibilizáció az utolsó alkalmazás után 1-2 nappal észlelhető. Ebben az esetben az ellenkező oldalon csepp bőrtesztet végeznek.

^ 4. Kutatások lefolytatása a higiéniai előírások értékének alátámasztására

4.1. Fehér patkányok intratracheális szenzibilizációja

Két fehér patkánycsoportot fecskendeznek be egyszer a légcsőbe 0,5-1,0 ml szuszpenziót a vizsgált leginkább zúzott porból 50 és 10 mg-os dózisokban 37 °C-ra melegített fiziológiás oldatban. A kontrollcsoportba tartozó állatokat 1 ml 37 °C-ra melegített fiziológiás oldattal injektáltuk.

A beadási eljárást jobb érzéstelenítés nélkül végrehajtani. Ehhez a patkányt függőleges helyzetbe rögzítik, a megfelelő adag szuszpenziót tartalmazó fecskendőhöz rögzített fémszondát a szájüregbe helyezik, majd a gége elülső falán keresztül a glottiszon keresztül vezetik (érzés elzáródás keletkezik) amíg meg nem áll a légcső bifurkációjában, a szondát kissé megemeljük és behelyezzük. A beadás után az állatot továbbra is függőleges helyzetben tartjuk több légzési mozdulatig. Ebben az esetben sípoló légzés és csikorgó hangok megerősítik a szuszpenzió behatolását a tüdőbe.

Az összes csoportba tartozó állatokat 5 nappal az intratracheális beadás után teszteljük.

^ 4.2. Egyszeri belélegzés

Egy anyag egyszeri belélegzése az érték meghatározásához Lim sens ac tengerimalacokon vagy fehér patkányokon célszerű elvégezni az érték megállapítása után Lim ac. Gyenge és mérsékelt allergének esetén általában elegendő a vizsgált anyagot a hatóanyag szintjén, a küszöbértéken és az általános toxikus hatásnál nagyságrenddel alacsonyabb koncentrációban belélegezni. Erős allergének vizsgálatakor alacsonyabb koncentrációjú inhalációt is kell végezni. Az egyes belélegzések időtartama 4 óra a munkaterület levegőjére vonatkozó szabványok meghatározásakor, és 24 óra a légköri levegő esetében. A csoportban lévő állatok számának legalább 10-nek kell lennie.

Patkányokon egyszeri belégzést kell végezni, hogy az értékeket össze lehessen hasonlítani Lim sens acÉs Lim ac egy állatfajból nyerték. Ha azonban egyetlen belélegzés nem okoz túlérzékenységet patkányokban, akkor azt tengerimalacoknál meg kell ismételni.

A szenzibilizációt egy héttel a belélegzés után észlelik.

Mögött Lim sens ac olyan koncentrációban vegyen be egy anyagot, amelynek egyszeri belélegzése 10 állatból 2-5-nél szenzibilizációt okoz, ami pozitív laboratóriumi és/vagy provokatív tesztekben nyilvánul meg. Ebben az esetben a szenzibilizációs mutatók csoportos átlagértékei nem térhetnek el statisztikailag szignifikánsan a kontrollértékektől.

^ 4.3. Ismételt belélegzés

Az ismételt inhalációt ugyanazon fajba tartozó állatokon hajtják végre, amelyeken megállapították Lim sens ac. Az expozíció időtartama: ha a munkaterület levegőjében a megengedett legnagyobb koncentrációt megállapították, napi 4 óra, heti 5 alkalommal a légköri levegőben megengedett legnagyobb koncentrációra, 14 nap folyamatos (kör-; az óra) expozíció. Ennek megfelelően 2 hét elteltével megtörténik az első állatkísérlet. Ha az eredmény negatív vagy megkérdőjelezhető, az inhalációt további 2 hétig folytatni kell ugyanabban a kezelési rendben, és meg kell ismételni a vizsgálatot. A munkaterület levegőjében a megengedett legnagyobb koncentrációk meghatározásakor az expozíció teljes időtartama nem haladhatja meg az egy hónapot, légköri levegő esetén a kísérlet legfeljebb 2 hónapig folytatható. Hosszabb expozíció nem tanácsos, mivel nem növeli az érzékenyítő hatást. Sőt, az ezt követő inhalációk a hatás gyengüléséhez vezethetnek a kompenzációs immunfolyamatok kialakulása miatt, és jelentősen megnehezítik a küszöbkoncentráció meghatározását. Így egy 2-4 hetes kísérlet hatásában elvileg egy krónikus toxikológiai kísérletnek felel meg, ami lehetővé teszi az értékek összehasonlítását. Lim chÉs Lim sens ch .

Az érzékenyítő hatás küszöbkoncentrációjának meghatározása ( Lim sens ch) ugyanazon elvek szerint hajtják végre, mint az egyszeri belélegzés esetén.

^ 5. Módszerek az érzékenység kimutatására

Ez a dokumentum a toxikológiai gyakorlatban széles körben tesztelt kémiai vegyületekkel és termékekkel szembeni szenzibilizáció azonosítására szolgáló módszereket ajánl: bőrprovokációs teszteket és laboratóriumi specifikus allergiavizsgálatokat, amelyek a vérsejtek allergénre adott in vitro reakcióján alapulnak. Ezek a tesztek különféle típusú allergiás reakciókat mutathatnak ki: késleltetett (provokatív csepp bőrteszt), azonnali újrakezdés (hízósejtekkel végzett tesztek), valamint immunkomplexek által közvetített (leukociták lízise és vérneutrofil tesztek). Az ajánlott tesztek nem korlátozhatják a kutatási kezdeményezést, hiszen a kísérleti állatokban szenzibilizáció kialakulását jelző specifikus allergiadiagnosztikai és nem specifikus egyéb módszerek alkalmazása is jogos (immunológiai, biokémiai, immunmorfológiai stb.).

^ 5.1. Provokatív bőrcsepegés teszt tengerimalacokon

A bőrcsepegési teszt (a továbbiakban: SP) elvégzéséhez ép tengerimalacok csoportján (6-8 egyed) előzetesen kiválasztják a vizsgált koncentrációt és a vizsgált anyagot. Ehhez az állat testének oldalsó felületein a szőrt 4-8 1 x 1 cm-es területen vágják le, gyapjúcsíkokkal elválasztva. Vigyen fel 1-3 csepp anyagot meghatározott koncentrációban a megfelelő területre. Általában az anyagot natív formájában és kétszeres vagy tízszeres hígításaiban vizsgálják. Oldószerként (hígítóként) vizet, 70°-os alkoholt, acetont és dimetil-szulfoxidot használnak. Ebben az esetben az egyik bőrfelület legyen kontroll, amelyre a megfelelő oldószert (hígítót) visszük fel. A reakciót 24 óra elteltével vizuálisan értékeljük.

Vizsgálati koncentrációként azt a maximális koncentrációt válasszuk, amelynek ép tengerimalacok bőrén történő alkalmazása 24 óra elteltével nem okoz irritációs reakciót (bőrpír, duzzanat).

A CP beállítása. 1 csepp vizsgálandó anyagot vizsgálati koncentrációban a tengerimalacok oldalának szőrtelen bőrére (kísérleti és kontroll). A reakciót 24 óra elteltével vizuálisan értékeljük a következő skála segítségével:

0 pont - nincs látható reakció;

1 pont - enyhe rózsaszín bőrpír az egész területen vagy a periférián;

2 pont - élénk rózsaszín bőrpír az egész területen vagy a periféria mentén;

3 pont - élénkvörös erythema az egész területen;

4 pont - bőrduzzanat bőrpírral vagy anélkül;

5 pont - súlyos duzzanat, fokális fekélyek, vérzések.

^ 5.2. Provokatív fülduzzanat teszt

A TOU vizsgálati koncentrációjának kiválasztása elvileg nem különbözik a CP koncentrációjától: ugyanazokat az oldószereket (acetont, 70°-os alkoholt) és az anyag hígításait (0,1-20%, ritkábban 50% vagy hígítatlanul) használják. termék). Az állatok összlétszáma azonban megnövekszik, mivel egy állaton csak két koncentráció tesztelhető (mindegyik fülhöz egy).

A TOU felállítása: először mérje meg mikrométerrel a fülkagyló középső részének vastagságát mm-ben, majd 25 μl vizsgálandó anyagot munkakoncentrációban a fül középső harmadának mindkét felületére kiegyenesítve és csipesszel rögzítve. . 24 óra elteltével a fül vastagságát újra megmérjük, és a felhordás előtti és utáni vastagságkülönbségből kiszámítjuk a TOU indexet. A TOC pozitívnak tekinthető tengerimalacokban és patkányokban, ha 0,03 mm vagy több, egereknél - 0,01 mm vagy több. Tengerimalacoknál a TOU pontokban számolható a következő skálán:

0 pont - 0,03 mm-ig;

1 pont - 0,03 - 0,07 mm;

2 pont - 0,08 - 0,12 mm;

3 pont - 0,13 - 0,17 mm;

4 pont - 0,18 - 0,22 mm;

5 pont - 0,23 mm vagy több.

^ 5.3. Az anyag munkadózisainak kiválasztása állati vérsejtekkel végzett specifikus allergiavizsgálatokhoz

A vérsejtekkel végzett specifikus allergiavizsgálatokat általában 0,1-0,01%-os oldatokkal (sóoldattal) végzik, így rosszul oldódó anyagokat is használhatnak. Olyan anyagokhoz, amelyek még ilyen koncentrációban is vízben oldhatatlanok, olyan vízben oldódó anyagot kell választani, amely csoportos antigéndeterminánssal rendelkezik: például formaldehid tartalmú polimer termékekhez - formaldehid oldatok; epoxicsoportokat tartalmazó polimer termékekhez - epiklórhidrin; minden krómvegyület esetében – CrCl 3; a Be fémhez és vegyületeihez - berillium-szulfát stb. A kikeményedett polimerek vizsgálatakor kivonatot használnak: a vizsgált anyagot és a fiziológiás oldatot 1:1 arányban polimerizációs termékeknél és 1:10 arányban polikondenzációs termékeknél 37 °C-on 3-5 napig inkubálva.

Az oldatokat nem műszaki termékekből, hanem vegytiszta anyagokból célszerű elkészíteni. Mivel a savas vagy lúgos környezet károsíthatja a vérsejteket, ügyeljen arra, hogy a munkaoldat pH-ja semleges vagy enyhén lúgos legyen (pH 7,2-7,4). Ha egy anyag instabil oldatot képez, minden kísérlethez munkaoldatot kell készíteni. A perzisztens oldatok hűtőszekrényben egy hónapig tárolhatók, de ügyelni kell a sterilitásukra, és ha az oldat zavarossá válik vagy filmréteget képez, az oldat nem használható fel.

A vizsgált anyagok munkadózisait (oldatkoncentrációit) ép állatok vérével végzett vizsgálattal választják ki, többféle hígítással. A szenzibilizáció azonosításához válassza ki az oldatnak azt a maximális koncentrációját, amely nem okoz a tesztnek megfelelő lízist vagy egyéb változást a vérsejtekben a csak véralvadásgátló hozzáadásával végzett kontrollmintához képest.

^ 5.4. A vér leukociták specifikus lízisreakciója

1. lehetőség: Adjon 0,1 ml fiziológiás oldatot (kontrollmintát) a tabletta első kémcsőjébe vagy üregébe, és adjon 0,1 ml fiziológiás oldatot a második kémcsőbe, amelyben előzőleg a vizsgált anyag munkadózisa van feloldva (teszt minta). Ezután mindkét kémcsőbe 0,1 ml tesztvért adunk. A reagáló rendszereket rázatással összekeverjük és 2 órán át 37 °C-on inkubáljuk. Minden egyes vérmintából 0,02 ml-t viszünk át egy 0,4 ml 3%-os vizes ecetsavoldatot tartalmazó lemez két kémcsőébe vagy üregébe a vörösvérsejtek elpusztítására.

2. lehetőség: Kísérleti állatok vérét a 0,5-ös jelig két melangeurbe szívjuk, majd az első melanzúrhoz fiziológiás oldatban elkészített 5%-os nátrium-citrát oldatot adunk 1-es jelig (kontrollminta), a másodikba ( ugyanerre az I) jelre - 5%-os nátrium-citrát oldat, amelyben a vizsgált anyag egy munkadózisát előzetesen feloldjuk (vizsgálati minta). A melangeurokat összerázzuk és 37 °C-on 2 órán át inkubáljuk. Ezután metilénkékkel színezett 3-5%-os vizes ecetsavoldatot adunk mindkét melangeurhoz a II. jelig.

A leukociták abszolút számát egy vérszámláló kamrában vagy egy picaskelen számolják meg. Melangeurok használatakor először 3-4 cseppet csepegtetünk le a kamra feltöltése előtt.

Az RSLL indikátor kiszámítása a következő képlettel történik:

A reakció akkor tekinthető pozitívnak, ha a leukocita lízis aránya 10% vagy magasabb. A 20% feletti RSLL mutató az állati érzékenység magas szintjét jelzi.

A kémiai allergének munkakoncentrációi nem okozhatják az ép állatok leukocitáinak több mint 9%-ának lízisét, és leggyakrabban 0,5-0,05%-os hígításnak felelnek meg fiziológiás oldatban; Nagyobb hígításra van szükség azoknál az anyagoknál, amelyek kifejezett irritáló és ezáltal citotoxikus hatást fejtenek ki a vérsejtekre.

^ 5.5. A neutrofilek specifikus károsodására adott válasz

A neutrofilek specifikus károsodásának reakciójának tesztelésére (a továbbiakban: PPN-teszt) fiziológiás oldatban elkészített 5%-os vizes nátrium-citrát-oldatot vagy 1,5%-os EDTA-oldatot (Chelaton-3) használnak véralvadásgátlóként (ellenőrizzék a az oldat pH-ja).

A vizsgált anyag munkakoncentrációját ugyanazzal az antikoagulánssal állítják elő, amelyet a vérhez adnak. A munkakoncentráció nem okozhat több mint 4%-nál nagyobb károsodást a neutrofilek ép állatokban a PPN teszt 1. változatában és 7%-ánál a 2. változatban.

A PPN teszt beállítása. Az első szilikonizált centrifugacsőbe (vizsgálati minta) 0,1-0,2 ml vizsgált anyag munkakoncentrációjú oldatát adjuk, a másodikba (kontrollminta) pedig ugyanennyi, csak az antikoagulánst. Ezután mindkét kémcsőbe ugyanannyi vért adunk a vizsgált állatból, majd a kémcsöveket óvatosan összekeverjük és 1 órán át szobahőmérsékleten tartjuk.

1. lehetőség. Az inkubáció befejezése után mindkét csőből közepes vastagságú keneteket készítünk egy tárgylemezen, amelyeket rögzítünk és megfestünk a kenetfestéshez használt módszerrel a leukocita képlet kiszámításához. Merítés alatt 100 neutrofilt számolunk meg, figyelembe véve a különálló kromatinolízist, piknózist, magfragmentációt, hiperkromatózist vagy kariolízist szenvedő sejtek számát.

2. lehetőség. Az inkubálás befejezése után óvatosan keverje össze újra, és adjon mindkét kémcsőbe 0,02 ml akridinnarancs vizes munkaoldatot (1:20000). Ezt az oldatot a hűtőszekrényben legfeljebb 2 hétig tárolják. Elkészítéséhez használjon akridinnarancs 1:100 hígítású jódos oldatát, amely sötét üvegben hűtőszekrényben több hónapig is eláll. 5 perc elteltével mindegyik kémcső tartalmából 1 cseppet két üveglapra csepegtetünk, fedőüveggel lefedjük, majd 3-5 perc múlva LUMAM-ban bemerítéssel megvizsgáljuk. 100 neutrofilt számolnak meg, amelyeket egyértelműen azonosítanak a rubingranulátumok bősége miatt a citoplazma halványzöld fénye hátterében.

A normál, ép neutrofilek oválisak vagy kerekek. A sérült neutrofileket jellegzetes amőboid kiemelkedések (fokozott sejtmobilitás) és morfológiai változások (egyenetlen „törött” élek, a sejt szélein a citoplazma ritkulásának kezdete, a citoplazma vakuolizációja, degranuláció, a kromatinmintázat durvulása) ismerik fel. a mag).

A reakcióindexet úgy számítjuk ki, hogy elosztjuk 100-zal a károsodott neutrofilek számának különbségét a kísérleti és a kontrollmintákban. A 0,05-ös vagy nagyobb mutatóérték az első opcióban, és a 0,08-as vagy nagyobb a második lehetőségnél az állat szenzibilizációját jelzi.

^ 5.6. Hízósejt-specifikus degranulációs reakció

A vizsgálatot altatásban vagy közvetlenül az állat lefejezése után végezzük. Ehhez ollóval nyissa ki a hasfalat a középvonal mentén, és óvatosan (lehetőleg gumi ujjbegyekkel, ne csipesszel) húzza ki a perisztaltikus bél leghosszabb hurkát (5 cm vagy valamivel hosszabb). Helyezze a hurkot egy tárgylemezre úgy, hogy a mesenterium 3 nagy része feltáruljon. Ezt követően mindkét oldalon le kell vágni a bélhurok egy-egy szakaszát, amelynek szélei 0,5 cm-rel az üveg széle fölött lógjanak. Ezután 40 μl fiziológiás oldatot alkalmazunk az első kontroll gyógyszer minden egyes szegmensére, és 20 μl friss autoszérumot (amelyet a vizsgálat napján készítettek el a hypoglossális vénából vett vérből) és 20 μl tesztanyagot a munkafolyadékban. koncentrációt alkalmazzuk a sóoldatban elkészített második kísérleti gyógyszer minden egyes szegmensére. Mindkét készítményt 5 percig 37 °C-on inkubáljuk, a ferde üveg szélét szűrőpapírral átitatva eltávolítjuk a folyékony fázist, és szükség esetén a bélfodort ismét óvatosan kiegyenesítjük. A készítményeket azonnal színezzük úgy, hogy 1%-os metil-alkoholos eozin-metilén-festék-oldattal (May-Grunwald szerint) 1-1,5 percig töltjük. A festéket úgy távolítjuk el, hogy az enyhén megdöntött készítményt pipettából vízzel lemossuk és levegőn hagyjuk teljesen megszáradni (általában 24 óra). Szárított minta segítségével szikével eltávolítjuk a teljes bélszakaszt és a mesenteria szektorai közötti septumot.

A preparátumokat bemerítéssel mikroszkóppal (10 x 80-as nagyítással) átlósan megszámoljuk 50 hízósejtet, figyelembe véve a köztük lévő sérült formákat. Sérültnek kell tekinteni azokat a hízósejteket, amelyeknek membránja sérült és a szemcsék a határain túl lépnek fel (degranuláció), valamint a teljesen sérültek. Az RDTK mutatót a következő képlet alapján számítják ki:

A reakció akkor tekinthető pozitívnak, ha a mutató 1,31 vagy magasabb.

Az RDTK vegyszerek munkakoncentrációi leggyakrabban 0,01-0,001%-os hígításoknak felelnek meg fiziológiás oldatban, amelyek hatására a kontroll állatokban a DTC mutató nem haladhatja meg az 1,0  0,3 értéket.

^ 5.7. Közvetett hízósejt-degranulációs reakció

Ez a teszt (a továbbiakban: RNTDC) a célsejtek (fehér patkányok hízósejtjei) reakcióján alapul a kísérleti állatok vérszérumában lévő allergiás antitestek és a vizsgált anyag (allergén) in vitro expozíciójára.

A hízósejt-készlet létrehozásához ép fehér patkányoknak éteres érzéstelenítésben intraperitoneálisan 6-10 ml 37 °C-ra melegített fiziológiás oldatot fecskendeznek be 0,5 ml heparinnal. A hasfal ollóval történő enyhe masszírozása után a has középvonala mentén 1,5-2,2 cm hosszú bemetszést ejtünk, a tetemet a levágással megfordítjuk és a bélhurkokból kifolyó váladékot heparinnal megnedvesített centrifugacsőbe gyűjtjük. . A váladékot 5 percig centrifugáljuk. 1500 ford./percnél a felülúszót lecsepegtetjük, és az üledéket összekeverjük, hogy hízósejtek szuszpenzióját kapjuk.

Az NDTC elvégzéséhez 0,05 ml hízósejt-szuszpenziót és 0,05 ml vizsgált állat szérumát adunk egy lemez vagy 2 kémcső 2 mérőhelyéhez. Ezután 0,05 ml fiziológiás oldatot adunk az 1. mintához (kontroll), 0,05 ml fiziológiás oldatot adunk a 2. (kísérleti) mintához, amelyben a vizsgált anyag munkadózisát feloldjuk (0,01-0,001%-os oldatok, amelyeknek nem okoz spontán károsodást a célsejtek több mint 5%-ában). Ezután mindegyik mintából egy cseppet csepegtetünk egy zsírtalanított üveglemezre, amelyet az üveg két végén négyzetek formájában előfestünk, semleges vörös 0,3%-os alkoholos oldatával, és szobahőmérsékleten szárítjuk. Minden cseppet fedőlemezzel fedünk le, melynek széleit vazelinnel megkenjük, és 37 °C-on 15 percig inkubáljuk.

A preparátumokat mikroszkópos vizsgálatnak vetjük alá 20x80-as nagyítással. Mindegyik preparátumban 50 hízósejtet számolunk meg. Az RDTC mutató kiszámítása és értékelése az RDTC beállításakor az 5.6. szakaszban leírtak szerint történik.

^ 5.8. A szenzibilizáció kimutatásának eredményeinek értékelése

Az I. stádiumú vizsgálatok során a szenzibilizáció kialakulásának gyakoriságát és intenzitását az összes alkalmazott provokatív és specifikus allergológiai teszt csoportátlagos mutatói alapján értékelik. A vizsgált anyag allergén aktivitási osztályát a táblázat szerint határozzuk meg. 1: az 1. osztályba az erős allergének, a 2. osztályba a mérsékelt allergének, a 3. osztályba pedig a gyenge allergének tartoznak. Ha a hatás eltér a szenzibilizáció gyakoriságában és a különböző provokatív és/vagy specifikus allergológiai tesztek csoportátlagos mutatóiban, akkor az anyag allergén aktivitását a legkifejezettebb mutató szerint értékelik.

Asztal 1

^ AZ ANYAGOK OSZTÁLYOZÁSA AZ ALLERGÉN AKTIVITÁS ERŐSSÉGE SZERINT

A II. kutatási szakasz inhalációs kísérletei során azt tekintjük effektív koncentrációnak, amelynél az állatok több mint felénél szenzibilizáció alakul ki, és az allergológiai vizsgálatok csoportátlagos mutatói statisztikailag szignifikánsan eltérnek a kontroll állatokétól. Az akut és krónikus szenzibilizáló hatások küszöbértékeként azokat a koncentrációkat kell érteni, amelyeknél az expozíció (egyszeri vagy többszöri) szenzibilizáció alakul ki 10 állatból 2-5-nél, és a csoportátlag mutatók nem térnek el jelentősen a kontroll állatokétól.

^ 6. A higiéniai előírások értékének indoklása

Az ipari vegyi allergénre vonatkozó egészségügyi szabvány értékének indoklása egy teljes kutatási terv végrehajtása során összehasonlítással kezdődik Lim sens ch Val vel Lim ch. Arányuktól függően meghatározzák az MPC alátámasztásának módszerét és az A jel (allergén) jelenlétét.

A munkaterület levegőjében a megengedett legnagyobb koncentrációk meghatározásakor a következő rendelkezéseket kell figyelembe venni.

Ha a korlátozó kritérium a toxicitás, pl. a szenzibilizációs küszöbértékek magasabbak, mint a toxicitási küszöbértékek, akkor az anyag allergénként gyakorlatilag nem jelent veszélyt, és általános toxikus hatásúnak van szabványosítva; ebben az esetben az A (allergén) jelzés nem kerül elhelyezésre.

Ha az általános toxikus és szenzibilizáló hatások küszöbértékei nem térnek el lényegesen, vagy azonosak, akkor az anyagot potenciálisan veszélyesnek kell tekinteni a toxikoallergiás elváltozások kialakulása szempontjából, és az általános toxikus hatása szerint normalizálni kell, amihez mellékelni kell az A jel (allergén).

Ha a korlátozó kritérium az érzékenység, pl. A szenzibilizációs küszöbértékek alacsonyabbak, mint a toxicitási küszöbértékek, akkor az anyag az allergiás betegségek etiológiai tényezőjeként veszélyt jelent, ipari vegyi allergénnek minősül és szenzibilizáló hatása szerint standardizálva van A jelzéssel ( allergén). Ebben az esetben a kémiai allergén biztonsági tényezőjét a táblázatból határozzuk meg. 2.

2. táblázat

^ BIZTONSÁGI TÉNYEZŐK KLim sens ch AZ MPC LÉTREHOZÁSÁNAK A MUNKATERÜLET LEVEGŐBEN

A légköri levegőben szenzibilizáló hatású káros anyagok megengedett legnagyobb koncentrációinak meghatározásakor szigorúbb kritériumok javasoltak, figyelembe véve, hogy gyermekek, idősek és különféle betegségekben szenvedők vannak kitéve. Ebben az esetben nemcsak a krónikus érzékenyítő hatás küszöbértékét veszik figyelembe, hanem a krónikus szenzibilizáló hatás zónáját is, amelyet a képlet határoz meg:

.

Továbbá a méretnek megfelelően Z sens ch határozza meg a k biztonsági tényezőt Lim sens ch táblázat szerint 3 Az érzékenyítő hatás eredményül kapott MPC-értékét összehasonlítják az általános toxicitás MPC-értékével, és a legalacsonyabb MPC-értéket választják ki higiéniai szabványnak. Az A (allergén) jelölést a munkaterület levegőjének maximális megengedett koncentrációjának alapelvei szerint kell elhelyezni.

3. táblázat

^ BIZTONSÁGI TÉNYEZŐK KLim sens ch AZ MPC LÉTREHOZÁSÁNAK LÉPTETÉSE ESETÉN

Tehát, ha a krónikus, toxikus és szenzibilizáló küszöbértékek egybeesnek és 0,01 mg/m 3 -t tesznek ki, akkor Z sens ch 1,0 lesz. Ebben az esetben a táblázat szerint. 3, az érzékenyítő hatások biztonsági tényezője nem lehet kevesebb 3,0-nál, és az MPC-érték 0,003 mg/m 3 lesz. Ha a toxicitás biztonsági tényezőjét 2,0-ra állítjuk, azaz a legnagyobb megengedhető koncentrációérték 0,005 mg/m 3 lesz, a legalacsonyabb megengedett legnagyobb koncentrációérték ajánlott, i.e. 0,003 mg/m3. De ha a vizsgált példában a toxicitás biztonsági tényezőjének legalább 5,0-nak kell lennie, azaz. az erre a hatásra meghatározott érték még kisebb lesz (0,002 mg/m 3), akkor ez kerül kiválasztásra.

Az OBUV gyorsított módszerrel történő alátámasztásakor, pl. az anyag szenzibilizáló hatásának zónáját az alábbi képlet alapján számítjuk ki, és az általános toxikus hatás alapján számított TBEL értékét annyiszorosára csökkentjük, ahányszor Z sensac .

.

Tehát, ha a toxicitás számításával az ULV értéke 0,2 mg/m 3 , és Z sens ac egyenlő 4, akkor a vizsgált anyag ULV-je az érzékenyítő hatást is figyelembe véve 0,05 mg/m 3 (0,2:4) lesz. Az A (allergén) címkét az MPC alátámasztására használt elvekkel összhangban helyezik el.

Ha analógia útján történő szabványosításkor az anyag által okozott szenzibilizáció gyakorisága és intenzitása egybeesik a referencia allergénnek való kitettségből eredővel, akkor az MPC vagy OBUV az A (allergén) jelzésű referencia allergén standard érték szintjén kerül beállításra. Ha a szenzibilizáció gyakoriságában és intenzitásában jelentős eltérés mutatkozik a referencia allergén hatásaihoz képest, a kutatás II. szakaszát végzik el, és a fenti rendelkezések alapján igazolják az MPC vagy ULV értékét.

A veszélyességi osztály meghatározása a megelőző toxikológia általánosan elfogadott szabályai szerint történik.

Az állatkísérletben megállapított MPC-érték klinikai és higiéniai biztonsági ellenőrzését a dolgozók munkakörülményeinek és egészségi állapotának összehasonlításával, a megelőző toxikológiában általánosan elfogadott technikák alkalmazásával, valamint epidemiológiai és allergológiai vizsgálat alapján végzik el. munkavállalók, beleértve a szelektív specifikus immunoallergén vizsgálatokat az adott ipari allergénnel szembeni szenzibilizáció gyakoriságának és súlyosságának azonosítására.

Alkalmazás

(Tájékoztató)

^ BIBLIOGRÁFIAI INFORMÁCIÓK

1. Kutatások végzése a munkaterület levegőjében lévő ipari allergének higiéniai szabályozására vonatkozóan. 1980. január 23-i 2121-80 számú módszertani ajánlások. A Szovjetunió Egészségügyi Minisztériuma. Riga, 1980.

2. Ideiglenes irányelvek a lakott területek légköri levegőjében megengedett legnagyobb szennyezőanyag-koncentráció megalapozásához 4681-88 sz. A Szovjetunió Egészségügyi Minisztériuma. M, 1989.

3. Módszerek a kémiai etiológiájú foglalkozási allergiás megbetegedések laboratóriumi specifikus diagnosztikájára. A Szovjetunió Egészségügyi Minisztériumának 1979. december 25-i 10-8/94 számú módszertani ajánlása. M, 1980.

4. Alekseeva O.G., Dueva L.A. Allergia ipari kémiai vegyületekre. M.: Orvostudomány, 1978. - 242 p.

5. Dueva L.A., Kogan V.Yu., Suvorov S.V., Shterengarts R.Ya. Ipari allergének. M. A Szovjetunió Állami Természetvédelmi Bizottságának Nemzetközi Projektek Központja. M., 1989. - 203 p.